免疫荧光 

免疫荧光技术又称为荧光抗体技术，将荧光标记技术和免疫学方法结合起来，利用抗原抗体相互作用从而对组织或细胞内的 抗原或抗体物质进行定位、示踪、定性以及相对定量等。 

实验意义

1.免疫荧光技术特异性强、敏感性高、反应速度快、结果清晰明确，在临床检验和科学研究工作上有很高的应用价值。 

2.操作简便，便于推广。 

实验步骤 

1.石蜡切片免疫荧光： 

①烘箱内进行烘片，然后将切片进行常规脱蜡至水； 

②抗原修复：使用水浴锅或电炉煮沸热修复，或者中档微波修复，缓冲液为0.01M柠檬酸钠缓冲液（pH6.0）； 

③去除内源性酶：3%H2O2室温孵育10 min阻断内源性过氧化物酶的活性后，PBS清洗3次×3 min； 

④封闭：5~10%正常血清封闭30 min； 

⑤一抗孵育：稀释好的一抗4℃孵育过夜，PBS清洗3次×3 min； 

⑥二抗孵育：将稀释好的带荧光标记的二抗，摇床缓慢孵育1 h，PBS清洗3次×3 min； 

⑦DAPI复染核，PBS清洗3次×3 min； 

⑧封片：Mounting Medium封片，凝固后拍照。（多重荧光染色：可使用绿色荧光、红色荧光和蓝色荧光进行三重荧光染 色）。 

2.冰冻切片免疫荧光： 

①新鲜组织经处理后，立即在恒冷冰冻切片机内切片，厚度为5~6 μm； 

②防脱玻片，贴片，室温阴干约12 h； 

③4℃纯丙.酮10 min处理，风干； 

④PBS漂洗3次×10 min； 

⑤0.3%Trion-100溶液37℃3次×10min； ④PBS漂洗3

次×5 min； 

⑥去除内源性酶；封闭，一抗孵育、二抗孵育、复核染、封片等与石蜡切片的处理类似，同样也可做多重荧光染色。

结果展示

实验完成周期及交付标准 

1.实验周期：1-2周 

2.交付标准：蜡块、切片、荧光图片、半定量分析、实验报告（实验步骤、试剂、仪器等） 需确认的信息 1.是做石蜡切片还是冰冻切片（推荐做石蜡切片） 2. 样本的种属和类型，是组织还是细胞？ 

3.样本的数量 

4.是否提供一抗，我方可代购 

5.半定量分析要求 

6. 拍照要求

欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。 

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