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皮下植瘤原位瘤模型

发布日期:2023-05-30 14:46:20   浏览量 :552
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一、皮下植瘤模型 

裸鼠肿瘤模型是比较常见和常用的一种肿瘤动物模型,它在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作 用。裸鼠肿瘤模型的接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式,接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标 本和体外培养的细胞系三种。

裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。 

常见模型 

肿瘤类型 

细胞系 

肺癌 A549,NCH-H358,NCH-H460,NCH-H526, NCH-H1299,NCH-H1650,NCHH1688,NCH-H1975,95-D,PC-10,Calu-3

乳腺癌 MDA-MB-231, MDA-MB-468, MDA-MB-453, HCC70, HCC1954, MDA-MB-361, MCF-7, BT474, BT549, SK-BR-3 

胃癌 MKN-28, MKN-45, BGC-823, HGC-27, MKN-28, SCH, SGC-7901, SNU-5, SNU16, MGC-803, AGS 肝癌 Hep-3B, Huh-7, PLC/PRF/5, QGY-7703, SK-HEP-1, SMMC-7721, HepG-2, BEL7402, BEL-7404, MHCC97H, LM3 

胰腺癌 AsPC-1, BxPC-3, Capan-1, Capan-2, CFPAC-1, MIAPaCa-2, PANC-1 

肾癌 ACHN, A498, 786-O, OS-RC-2 

结直肠癌 COLO 201, COLO 205, DLD-1, HCT-116, HT-29, LoVo, LS1034, LS174T, Caco2, RKO , SW480, SW620, SW1116, SW948 

胶质细胞瘤 A172, U87-MG, U251, U343MG, U373, SW1783

常见案例 

裸鼠皮下成瘤模型(CDX模型) 

模型描述:


 

常见问题 

1.接种量 要查文献来确定接种量,在找不到任何相关资料的情况下,就用到1*107/0.2ml/site,再高也没有意义 了。如果你的细胞很小,1*107/0.1ml也可以操作,不至于很粘稠,那么最好是1*107/0.1ml/site。查文献 看他们的构建条件是什么样的,比如培养条件,接种量,接种位置什么的,是不是一定要用雌性鼠等等。 

2.接种部位 腋窝中部外侧皮下为好。皮下肿瘤模型中,想要成瘤率高就接种在腋下。接种时由裸鼠体侧腰部稍靠 上的部位进针,要保证与接种点的距离小于针头的长度,向头部方穿行,绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉 层,当针头到达接种位点时注射,退出针头。 

3.是否用手术标本荷瘤 如果是药效试验,不建议用手术标本,因为SFDA的临床前研究指导原则上明确指出要用建株的肿瘤 株进行试验,因为用手术标本的试验可重复性差。取材的部位:肿瘤生长活跃,状态良好,结缔组织比较 少的地方。运送途径:无菌、冰浴保温,无菌培养液浸泡,时间不能超过1个小时。最好一个小时内就能 够接种到动物体内。接种部位:腋下。另外,手术标本还有一个风险:你不能保证取得的标本一定能够顺 利地成瘤并且用于试验。 

4.接种时间 最好在1小时之内完成。但在我实际操作过程中,裸鼠的数量又多,1小时之内根本做不完的,所以你 可以预先将细胞放在冰盒里暂为保存。 

5.肿瘤倍增时间 肿瘤动物实验模型肿瘤的倍增时间(doubling time),应该是在瘤体积100-800之间计算。

 二、原位瘤模型 

原位移植肿瘤模型的制作 

1.肿瘤的来源:人的胸腹水,手术切除的肿瘤,小鼠自发或诱发的肿瘤,或者已经建系的肿瘤细胞株。 2.移植瘤的建立一般是选择自发瘤或诱发瘤组织块,或人的原代肿瘤细胞为佳。 已建立的肿瘤细胞株经过多次传代后,其生物学特性已发生一定程度的改变,如形态学上的改变、恶 性程度以及转移特性的变化等 

3.移植瘤的接种方法 

1)腹水瘤移植接种法 

2)实体瘤移植接种法 

(1)小块接种法 

(2)肿瘤组织浆接种法: 

(3)培养细胞接种法 

4.腹水型肿瘤模型的制作 

常规复苏肿瘤细胞并培养,取指数生长期肿瘤细胞,离心收集,显微镜下细胞计数,调整细胞浓度为 1×107/ml,取健康小鼠,无菌条件下每只小鼠腹腔接种细胞悬液 0.2-0.5 ml,约 8-10 d 成腹水瘤。 

5.皮下肿瘤模型的制作 

1).细胞接种法:取腹腔接种肿瘤细胞 7-l0d 、腹水生长良好的小鼠脱颈处死,无菌抽取腹水以生理盐 水稀释调整细胞浓度为 1×107/ml(一般以生理盐水 l:2-l:3 倍稀释),每只 0.2 ml 接种到小鼠腋窝皮下, 建立小鼠皮下移植瘤模型。抽出的腹水应为白色之浓稠液体为佳。.直接将体外培养的指数生长期肿瘤细 胞,离心收集,显微镜下常规细胞计数,调整细胞浓度为 1×107/ml,取健康小鼠,无菌条件下每只小鼠 皮下接种细胞悬液 0.2 ml。 

2).组织块接种法:先用细胞接种法建立皮下肿瘤模型。 选择接种后 7-l0d,肿瘤生长旺盛且无溃破的 动物,脱颈处死后消毒操作部位皮肤然后切开,选择生长良好的瘤组织置于无菌平皿内(平皿内放置少许生 理盐水或细胞培养液)。将肿瘤组织剪成 2-3mm 的小块,向无菌套管内塞人一小块,接种于健康动物前腋 窝皮下,整个接种时间应尽早可能短,一般不应超过 30min。如接种动物数较多,可制成细胞悬液进行接 种,以上法切取生长良好的癌组织,剪成小块,用无菌玻璃研磨,磨匀后装人无菌容器内,加生理盐水稀 释 l:3-l:4 的瘤细胞,每个动物接种 0.2ml。 

6.移植性肿瘤模型的优点: 

1).可以使一群动物同时带有相同的肿瘤。 

2).肿瘤生长速率比较一致,个体差异较小。 

3).接种的成活率高,接近 100% ,对宿主的影响也类似,易于客观的判断疗效。 

4). 肿瘤形态、生长率、对药物的敏感性、动物的死亡时间等非常相近。、 

7.皮下移植性肿瘤的缺点:
1).皮下移植肿瘤生长速度快,增殖比率高,体积倍增时间短,是与人体肿瘤的显著不同。
2).生物学行为往往仅有肿瘤的局限性生长和浸润,难以观察到重要的淋巴和血道转移行为,与自然状态肿痛相关性不高,不能很好地模拟肿痛在人体内的自然生长过程,对干研究具病理生理过程存在较大的局限性,仅适合用作评价药物疗效的初步筛选模型。

8.原位移植肿瘤模型: 指将肿瘤细胞或肿瘤组织块原位移植到免疫缺陷动物的组织器官内,使之产生肿瘤并形成自发性转移 灶。此种模型是目前较为理想的动物模型,为肿瘤的生长提供了最适宜的环境,能较好的模拟人体内肿瘤 的发生、 发展、侵袭及转移的全过程。 

9.原位移植肿瘤模型的制作: 

1).肿瘤的来源:人的胸腹水,手术切除的肿瘤,小鼠自发或诱发的肿瘤,或者已经建系的肿瘤细胞 株。2).方法:将稀释好的肿瘤细胞 50-100ul 约 2×108/ml 直接接种到器官的浆膜下。或者先将肿瘤细胞 皮下接种,达 1 cm左右,瘤组织取出切成 1-3mm 的小块。将准备好的癌组织块植入器官的浆膜下,缝合 浆膜。

10.同位移植瘤动物模型的优点: 可以模拟出同原发肿瘤发病部位相似的肿瘤微环境,同时也能够在相应的部位形成转移灶,可以避免 由于移植位点特异性所引起的假阳性结果.并且可以对临床上的一些情况进行模拟,如应用在转移癌的研 究来模拟那些临床上已经切除了原发肿瘤而又发生了转移的患者。同位裸鼠移植瘤动物模型成为我们研究 治疗方案,阐明与浸润、转移和肿瘤治疗相关的分子生物学机制提供了重要而有效的手段。 

11.原位移植瘤模型的应用: 

1)为弥补异位移植方法的不足,避免假阳性结果的产生。对于所有实验性治疗方法来讲,最终都要应 用原位移植瘤动物模型来更深一步研究其抗肿瘤谱及其分子生物学机制。 

2)对于细胞毒类药物,那些对肿瘤微环境起调控作用的抗肿瘤药物只可以在原位移植瘤动物模型上进 行研究。如可以调节肿瘤细胞产物的化疗药物和可以调控机体局部组织反应的药物。 

3)如果想观察药物对转移性肿瘤的作用,最好应用原位裸鼠移植瘤动物模型进行研究。 

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