显示DNA的传统方法是富尔根(Feulgen)反应,切片先用稀盐酸处理,DNA经弱酸(1mol/L HCL)水解后,在60℃条件 下使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接打开,脱氧核糖的一端释放出醛基,并在原位与Schiff试剂反应生成紫红色产 物。 原理同PAS反应,使细胞核DNA显紫红色。在此过程中RNA不受影响,故染色具有DNA特异性。准确的温度和盐酸浓度, 适宜的水解时间是成功的关键。水解过度或不足均降低染色强度。
配制试剂:
1.1mol/L HCL:将8.5ml浓盐酸和91.5ml蒸馏水混合即得;
2.0.5%亮绿水溶液;
染色步骤:
1.取培养于盖玻片上的贴壁原代细胞,用Hanks液漂洗三次;
2.在卡诺(Carnoy)固定液中固定10min,然后蒸馏水洗三次;
3.移入60℃浓度为1mol/L的HCL中静置10min;
4.用蒸馏水漂洗几次;
5.放入Schiff试剂中静置30—60min,可随时检查显色情况;
6.用自来水冲洗5min;
7.再用蒸馏水漂洗;
8.不同浓度梯度乙醇溶液脱水;
9.用二甲苯透明、树胶封片; 结果: 原代细胞核内DNA显紫红色,细胞质呈绿色。
结果展示:
收费标准/服务周期/提供结果:
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